无乳链球菌探针法荧光定量PCR试剂盒检测使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）?？梢杂?0μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）
内分泌腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)重组蛋白
内凝集蛋白1(ITLN1)重组蛋白
内皮素1(EDN1)重组蛋白
内皮素转化酶1(ECE1)重组蛋白
内皮糖蛋白(ENG)重组蛋白
内皮细胞TEK酪氨酸激酶(Tie2)重组蛋白
内皮型一氧化氮合酶(NOS3)重组蛋白
内皮脂肪酶(LIPG)重组蛋白
内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制因子(Vaspin)重组蛋白
内脂素(VF)重组蛋白
钠/钾离子转运ATP酶β3肽(ATP1β3)重组蛋白
脑红蛋白(NGB)重组蛋白
脑型脂肪酸结合蛋白(FABP7)重组蛋白
脑源性神经营养因子(BDNF)重组蛋白
尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)重组蛋白
黏病毒耐药蛋白1(MX1)重组蛋白
尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)重组蛋白
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)重组蛋白
尿皮质素1(UCN1)重组蛋白
凝溶胶蛋白(GS)重组蛋白
凝血因子Ⅱ(F2)重组蛋白
凝血因子Ⅴ(F5)重组蛋白
