大鼠肠组织提取物实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大??；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
M1(小鼠白血病细胞)
M14(人黑色素瘤细胞)
MA-891(小鼠乳腺癌高转移细胞)
MDA-MB-435(人乳腺癌高转移细胞)
MDA-MB-468(人乳腺癌细胞)
MKN-28(人胃癌高转移细胞)
MKN45(人胃癌细胞)
MuM-2B(人眼脉络黑色素瘤细胞)
MuM-2C(人眼脉络黑色素瘤细胞)
MV3(人黑色素瘤细胞)
MX-1(人乳腺癌细胞)
NCI-H1975(人肺腺癌细胞)
NCI-H460(人肺癌细胞)
NCI-H661(人大细胞肺癌细胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病细胞G-CSF依赖性)
PA319(人大肠癌细胞)
PATU8988(人胰腺癌细胞)
PC-3M(人前列腺癌细胞)
SF-295(人XG恶性胶质瘤细胞)
SMC-1(人胸膜瘤细胞)
SW1116(人结肠腺癌细胞)
