规格参数：

产品名称：DH5α 感受态细胞
规格 ：100ul*20、100ul*100
分类：克隆感受态细胞
用途：生化试剂（用于科研试验研究）
储存条件: -70℃保存，必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
外观:（性状） 干冰运输，单加10kg干冰费
单位: 袋

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 感受态细胞*在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质?；蛄硬锸庇η崛岵僮?。
3. 转化高浓度的质?；蚋咝实牧硬锟上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木?。
同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质?；蛄硬铮┎⒂檬植Υ駿P管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

甲胎蛋白单克隆抗体（包被） AFP(A2) 0.1ml
甲胎蛋白单克隆抗体(检测) AFP(A4) 0.1ml
ADP核糖基化因子结合蛋白1抗体 ARFIP1 0.1ml
芳香烃受体抗体 AHR 0.1ml
吸引素抗体 ATRN 0.2ml
腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗体 ABCA1 0.1ml
蛋白激酶B2 AKT2 0.1ml
生成素2抗体 Angiopoietin 2 0.1ml
芳香化酶/细胞色素P450/雌激素合成酶抗体 Aromatase 0.1ml
腺苷A2A受体抗体 Adenosine Receptor A2a 0.1ml
蛋白激酶A锚定蛋白95抗体 AKAP95 0.1ml
顶膜钠依赖性胆盐转运体蛋白抗体 ASBT 0.1ml
去整合素样金属蛋白酶8抗体 ADAM8 0.2ml
芳香乙酰胺脱乙?；秆鞍?抗体 AADACL3 0.2ml
ACN9蛋白抗体 ACN9 0.2ml
双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（N端） ADAR1 (N-terminus) 0.2ml
腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体 AMPK alpha 2 0.1ml
腺苷酸激酶抗体 ADK 0.1ml
α2巨球蛋白样蛋白1抗体 α2ML1 A2ML1 0.1ml
细胞凋亡相关蛋白3抗体 3-Apr 0.1ml
肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体 Actin 0.1ml
ATP结合蛋白家族7抗体 ABCB7 0.2ml
ASCL2蛋白抗体 ASCL2 0.2ml
磷酸化脊髓蛋白1抗体 phospho-Ataxin 1(Ser775) 0.1ml
磷酸化活化转录因子1抗体 phospho-ATF1 (Ser63) 0.1ml
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Ser480) 0.1ml
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 0.1ml
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 0.1ml