实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl

PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；煸群?，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR

牛肾细胞;MDBK(BVDV-free) 鼠胚胎成纤维细胞，PA317细胞 MLA-144细胞，长臂猿瘤AMPSO奎诺二甲基酯5克FMP，96%

EB病毒转化的人B细胞(拉祜族);KM94062,2′-联-双(3-... ABTS diammonium salt,≥98% 30931-67-0 1G 通用试剂

ELANE Others Mouse 小鼠 Neuophil Elastase / ELANE / ELA2 人细胞裂解液 (阳性对照) 言醋胍 GUcNIDINqxy7noCHLORIDq1920-1-1

CL-0056CCD-1095Sk(人浸润性导管癌旁皮肤细胞)5×106cells/瓶×2xy7noxynaphtholblue色酚兰100克BR，1mg/ml

LTA4H Others Human 人 Leukoiene A4 Hydrolase / LTA4H 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)124-02-7二1丙基胺Diellylemine
膀胱成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)辛基三甲基氯化铵;八烷基三甲基氯化铵Trimethyloctylammonium chloride 质量规格：>99%,BR

NEK7 Others Human  NEK7 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) DMSDMS质量规格：BR

EB病毒转化的B细胞;KMY1022D-正亮氨酸(>99%,BC)D-Norleucine质量规格：>99%,BC

ZR-75-1细胞，癌细胞 转基因细胞系,CNE1-lmp\l细胞 CL-0309TG-905(脑胶质母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2盐酸多巴胺Dopamine 质量规格：>98%,BR

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO 1beta9,12.5 Clone 36DSTDST质量规格：BR
小鼠系;LA795肾上腺色腙（卡洛）标准品Carbazochrome质量规格：供检查用

羊膜上皮细胞(HAEpic)( 5×105 )吡拉西坦（标准品）Piracetam质量规格：含量测定

CM-R120大鼠角膜上皮细胞完全培养基100mL（标准品）Furazabol质量规格：UV法含量测定

小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-L1 小鼠成纤维细胞完全培养基 100mL乙水杨胺（标准品）2-Ethoxybenzamide质量规格：含量测定

海马神经元 Human枸橼酸（标准品）Citric acid monohydrate质量规格：含量测定
人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3地西他滨/ 5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶核苷Decitabine质量规格：>99.5%,BR,可用于细胞培养

APCS Others Human 人 Serum amyloid P compone / APCS / SAP 人细胞裂解液 (阳性对照) 地西他滨/ 5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶核苷（标准品）Decitabine质量规格：HPLC>98%,标准品

兔脂肪间质干细胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶核苷5-Aza-2′-deoxycytidine质量规格：>97%,进分sigma货号A3656

BE(2)-M17细胞，人神经母细胞瘤细胞 寄生曲霉 293来源病毒包装细胞;ΦA醋酸德舍瑞林Deslorelin Acetate质量规格：>99%,BR

SUP-B15(人Ph+急淋细胞系) 5×106cells/瓶×2去氨加压素;去氨压素Desmopressin Acetate质量规格：>98%,BR,醋酸盐形式

猪病毒 I 型（伪病毒）PCR试剂盒本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。