实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；煸群?，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA泛酸钙,维生素B5D-Calcium Panthotenate 质量规格：供HPLC法含量测定用

AR42J细胞，*细胞 皮肤成纤维细胞系,BJ细胞 小鼠神经母细胞瘤细胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]盐酸特拉唑嗪（标准品）Terazosin HCl质量规格：含量测定

HT-29(细胞) 5×106cells/瓶×2氯化钠（标准品） chloride质量规格：含量测定

Gibco 17105041 中性蛋白酶Dispase II, powder 5 g氨力农（标准品）Amrinone质量规格：UV法含量测定

膀胱平滑肌细胞裂解物HBdSMCL更昔洛韦（标准品）Ganciclovir质量规格：含量测定
肝细胞培养基HM-prf3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸(>99.0%(GC)(T))3,5-Dimethoxy-4-hydroxycinnamic Acid 质量规格：>99.0%(GC)(T)

REG4 Others Human  REG4 / RELP / GISP 细胞裂解液 (阳性对照) 4'-羟基偶氮苯-2-羧酸(>98.0%(HPLC)(T))4'-Hydroxyazobenzene-2-carboxylic Acid质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

EB病毒转化的B细胞;KM94012',3'-二脱氧尿苷(ddU)2',3'-Dideoxyuridine质量规格：>98%,进分

HNE2细胞，细胞 小鼠瘤细胞,Yac-1细胞 CM-H014气管平滑肌细胞完全培养基100mL潮霉素BHygromycin B质量规格：>90%,粉末,进分

Neuro-2a/N2a(小鼠脑神经瘤细胞) 5×106cells/瓶×25'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N2-异丁?；?span>-2'-脱氧鸟苷(DMT-ibu- dG)iBu-DMT-dG质量规格：>98%,BR
滋养层绒毛细胞总RNAHVT NA偏苯三1(>95.0%(T))Trimellitic Anhydride质量规格：>95.0%(T)

小鼠神经皮质细胞(MN-c)(1×106)2,4-二氨基-6-异丙氧基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-6-isopropoxy-1,3,5-triazine质量规格：>98.0%(T)

家猫皮肤细胞;FCA-S12,4-二氨基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-1,3,5-triazine质量规格：>98.0%(T)

小鼠B细胞杂交瘤细胞;W6/32 小鼠成年表皮角质形成层细胞完全培养基 100mL2,4-氨基-6-甲氧基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-6-methoxy-1,3,5-triazine质量规格：>98.0%(T)

SF9, 昆虫卵巢细胞 其它2,4-二氨基-6-二甲氨基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-6-dimethylamino-1,3,5-triazine质量规格：>98.0%(T)
CL-0397NCI-H23(非小细胞细胞)5×106cells/瓶×2蓝铜肽/甘氨酰-L-组氨酰-L-赖氨酸质量规格：>98.5%GHKcu/Growth-modulating peptide

绒毛膜间充质基质细胞 Sars蛋白表达株，293001B细胞 NCI-H520 [H520](细胞)氨苯蝶啶 质量规格：>98%,BRTriamterene

高转移细胞株;PC-3M IE8卡拉胶质量规格：粘度≥0.005 pa.sCarrageenan

BSG Others Mouse 小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 细胞裂解液 (阳性对照) 普仑司特质量规格：≥98%,BRPranlukast

EB病毒转化的B细胞;KMY09031酸美托洛尔质量规格：>99%,BRMetoprolol tartrate

地衣形芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。