PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：念珠状链杆菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

9,16-Dioxo-10,12,14-octadecatrienoic acid  217810-46-3  中文名：  分子式：C18H26O4    Rat thrombus precursor protein (TpP) ELISA Kit 大鼠前体蛋白(TpP)ELISA试剂盒

11-Hydroxyjasmonic acid  140447-14-9  中文名：  分子式：C12H18O4    Humanai-glycoproteinaibody,GPELISAKit 人抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Soyacerebroside II  115074-93-6  中文名：大豆脑苷II  分子式：C40H75NO9    humandihydropyrimidinase-like3,DPYSL3ELISA试剂盒人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Sucrose  57-50-1  中文名：  分子式：C12H22O11    组织MUSK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名：5-羟甲基糠醛  分子式：C6H6O3    Humanphospholamban,PLNELISAKit人受0蛋白(PLN)ELISA试剂盒规格：96T/48T
兔子Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  6-Amino-1-methyluracil  2434-53-9  中文名：  分子式：C5H7N3O2 

兔子Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2  度：98.0%

兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3  度：98.0%

兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  6972-78-7  中文名：  分子式：C5H6N4O3  度：98.0%  关键词： 

兔子Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3
念珠状链杆菌PCR检测试剂盒直销MDA-MB-157(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2醋酸德舍瑞林质量规格：>99%,BRDeslorelin Acetate

Anglne(人细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R067大鼠肾足突细胞完全培养基100mL 人胚肾细胞-F克隆;293F去氨加压素;去氨压素质量规格：>98%,BR,醋酸盐形式Desmopressin Acetate

CM-H071人肾动脉平滑肌细胞完全培养基100mL地塞米,氟美（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Dexamethasone

SPHK1 Others Human 人 SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸地尔硫卓质量规格：>98%,BRDiltiazem HCL

人表皮色素细胞-胎儿HEM-f盐酸地尔硫卓(标准品)质量规格：含量测定，标准品Diltiazem HCL
SLAMF6 Others Human 人 Ly108 / SLAMF6 人细胞裂解液 (阳性对照) LY2940680质量规格：>98%LY2940680

人滋养层绒毛细胞总RNAHVT NALY2886721 质量规格：>98，BACE1 inhibitorLY-2886721

小鼠神经皮质细胞(MN-c)(1×106)利尼伐尼；ABT869质量规格：>98%，VEGFR/PDGFR抑制剂 Linifanib (ABT-869)

家猫皮肤细胞;FCA-S1头孢匹林钠(标准品)质量规格：含量测定Cefapirin

小鼠B细胞杂交瘤细胞;W6/32 小鼠成年表皮角质形成层细胞完全培养基 100mLL-赤-鞘氨醇(合成物)质量规格：美国进口L-erythro-Sphingosine (synthetic)
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。