PCR实验方法步骤：
胡桃源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：胡桃源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
EB (NBL-4)细胞，牛胚气管细胞 SW 1088[SW-1088; SW1088](人脑星型细胞) CM-H018人成纤维细胞完全培养基100mL镉黄，英文名或英文缩写：Cadmium sulfide，级别：AR，99.5%，规格：10克

EGF Protein Mouse 重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白鳞钼醋铵 cMMONIUM PHOSPHOMOLYBDcTq HYDRcTq 2473-94-3

MKN-28(人高转移细胞) 5×106cells/瓶×2 脑微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)苄氧羰基甘酸，英文名或英文缩写：CBZ-L-Gly，级别：特，99%，规格：100克

上皮细胞培养基PEpiCMFORMALDEHYDE-FREERNAGELKIT无RNA胶试剂盒RTsigma

SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) 3374-22-9DL-半胱酸;DL-2-基-3-;DL-半膀胱基酸;DL-β-;DL-脬基酸DL-Cysteine
PTX3 Others Human 人 PTX3 / TNFAIP5 人细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-Tyr(tBu)-OHFmoc-O-叔丁基-L-酪酸500克特，98.5%

BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.11,4-二肖基本;队二肖基本 1,4-bqnzqnq 9-94-4

NCR1 Others Rat 大鼠 NCR1 / NK-p46 人细胞裂解液 (阳性对照) 水合安嘌呤(-20℃) Mqthotrqxctq 1929-2-

原代神经胶质细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1mlDodecane正十二烷20毫克AR，98%

ECV-304细胞，人脐内皮(具有T24细胞特性) 金黄色葡萄球菌 人牙龈成纤维细胞总RNAHGF NA13007-92-6六羰基ChroMiuM hexacarbonyl
GDNF Others Human 人 GDNF 人细胞裂解液 (阳性对照) SEQUENCINGGELLOADINGDYE,3X3X核酸电泳上样缓冲液,测序用超级暗紫色微粘稠液体COLDsigma

大鼠神经胶质细胞完全培养基 100mL溴化镉 CcdMiuM broMidq 7789/4/6

MKN-45人细胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBSD-(+)-基葡萄糖盐... D-(+)-Glucosamine hydrochloride (≥99%) 66-84-2 25G 通用试剂

IFNG Protein Mouse 重组小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 标签)N-苄氧羰基-D-本，英文名或英文缩写：Z-D-pxenylalaninol，级别：BR，98%，规格：10克

NCI-H157(人非小细胞) 5×106cells/瓶×2 SRSV/3T3(SRSV转化的3T3细胞)(L-抗坏血酸,维生素C)
胡桃源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒NRG1 Protein Canine 重组狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 标签)2,9-二氯-1,10-菲罗啉(>97.0%(GC)(T))2,9-Dichloro-1,10-phenanthroline质量规格：>97.0%(GC)(T)

MDA-MB-435(人癌高转移细胞) 5×106cells/瓶×2 脑动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3,4,7,8-四甲基-1,10-菲罗啉(>98.0%(HPLC)(T))3,4,7,8-Tetramethyl-1,10-phenanthroline质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

间充质干细胞生长添加物-无血清MSCGS-25,5'-硫代双水杨酸(>98.0%(GC)(T))5,5'-Thiodisalicylic Acid质量规格：>98.0%(GC)(T)

NRXN3 Others Human 人 NRXN3 / Neurexin-3-beta 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC))4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone质量规格：>98.0%(GC)

COS-1 非洲绿猴SV40转化的肾细胞双[3,5-二溴-4-(2-羟乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC))Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone质量规格：>96.0%(GC)

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。