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              上海帛科生物技术有限公司
                 
                 
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              痒螨通用探针法荧光定量PCR试剂盒
              • 品牌:帛科
              • 产地:进口、国产
              • 货号:BKP7125
              • 价格: ¥3800/盒
              • 发布日期: 2020-06-24
              • 更新日期: 2025-07-11
              产品详请
              产地 进口、国产
              品牌 帛科
              货号 BKP7125
              用途 公司产品仅用于科研
              包装规格 50T
              纯度 详见说明书%
              CAS编号
              是否进口

              探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图:

              产品名称

              英文名称

              货号

              痒螨通用探针法荧光定量PCR试剂盒

              Psoroptes spp.

              BKP7125

              概述:
              产品仅供科研使用荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中,随着PCR循环数的递增,PCR产物不断积累,荧光信号也会相应的增加,这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测。本公司根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNARNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

              实时荧光定量PCR
              实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
              1
              Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
              2
              Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
              外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性*的定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物考核、病原体检测等诸多领域。

              使用方法:
              一、痒螨通用探针法荧光定量PCR试剂盒稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL610倍稀释度为例)
              1.
              注意:产品仅供科研使用由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
              2.
              标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
              3.
              用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
              4.
              7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
              5.
              换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
              6.
              换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
              7.
              重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
              二、样品DNA的制备
              8.
              如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)??梢杂?/span>10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PCNC的体积也必须是200μL。
              9.
              用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
              三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
              10.
              如果只做1次重复,则标记N+9PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加23倍。
              11.
              产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)

              荧光定量PCR服务:
              简介:实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。
              1
              、荧光定量PCR服务要求:
              01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。
              02)请提供已知的全长基因序列。
              03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等
              2
              、荧光定量PCR操作程序
              01)引物(探针)设计与合成。
              02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。
              03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。
              04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。
              3
              、荧光定量PCR的收费标准:
               
              我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

              实验过程:
              一、试剂准备
              1. DNA
              模板
              2
              .对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
              3
              10×PCR Buffer
              4
              2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP2mM
              5
              Taq
              二、操作步骤
              1
              .在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
              10×PCR buffer             5μl
              dNTP mixl                 4μl
              引物110pM               2μl
              引物210PM              2μl
              Taq
              酶(2U/μl            1μl
              DNA
              模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
              ddH2O               50 μl
              PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
              2
              .调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循环30-35次,zui后在72 保温7min。
              3
              .结束反应,PCR产物放置于4待电泳检测或-20长期保存。
              4
              PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
              三、注意事项
              1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
              2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
              3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
              4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
              5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
              6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
              7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
              人恶性非霍奇金瘤患者的自然杀伤细胞;NK-92 [NK92]Calciumtetrahydrate枸橼酸钙5毫克CP

              TGFBR3 Others Mouse 小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 人细胞裂解液 (阳性对照) 苄基三丁基录化铵 Bqnzyltributylcmmonium chloridq 3616-79-7

              NCI-H446 人小细胞细胞TSTU N,N,N',N'-Tetramethyl-O-(N-succinimidy... 105832-38-0 1G 染色剂

              hDPSCs, 人前牙髓干细胞BAEE盐酸-Na-本甲酰-L-精酸乙酯10BR,98%

              人脐动脉平滑肌细胞(麦康凯琼脂)
              BT-549(
              人管癌细胞) 5×106cells/瓶×2B-27添加剂shēng huà shì jì容量:500

              CN3 Others Human CN3 / Coactin-3 人细胞裂解液 (阳性对照) 固盐 Fast Black B Salt 53760-27-3 25G 通用试剂

              大鼠细胞;IR983F转铁蛋柏 HOLO-TRcNSFqRRIN 11096-37-0

              REG3A Others Rat 大鼠 REG3A 人细胞裂解液 (阳性对照) HOTSTARTPCR-TO-GELTAQPCRMASTERMIX,2X热启动PCR-TO-GEL TAQ PCR MASTER MIX, 2X生物技术级蓝绿色透明液体 -20 degrees Csigma

              人胰岛β细胞完全培养基 100mL102-04-5二苄基甲酮1,3-Dipxenyleetone
              GM2A Others Human
              GM2A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 肉桂油Cinnamon oil质量规格:工业级

              CM-M057小鼠肾系膜细胞完全培养基100mL柠檬醛(>95%,Pract Grade)Citral质量规格:>95%,Pract Grade

              WM35, 人色素瘤细胞 神经母细胞瘤细胞,M17细胞 PC-12分化(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤)柠嗪酸(>98%,BR)Citrazinic acid质量规格:>98%,BR

              小鼠细胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]草酸钴(>99%,BR)Cobalt (II) oxalate质量规格:>99%,BR

              IL10RB Others Human IL10Rb 人细胞裂解液 (阳性对照) 刀豆素A(> 95%,BR)Concanamycin A质量规格:> 95%,BR
              痒螨通用探针法荧光定量PCR试剂盒FGF21 Others Mouse 小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 人细胞裂解液 (阳性对照) 爱维莫潘Alvimopan质量规格:美国进口

              AAV-293 人胚肾细胞N-去甲基拓扑替康N-Desmethyl Topotecan质量规格:美国进口

              CL-0214SK-N-SH(人神经母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2拓扑替康羧酸钠盐Topotecan Carboxylic Acid  Salt质量规格:美国进口

              MA, 小鼠星形胶质细胞拓扑替康Topotecan质量规格:美国进口

              Sars结构蛋白表达株;293 001B 人肾系膜细胞完全培养基 100mL15-酮基氟前列醇异丙酯15-keto Fluprostenol isopropyl ester质量规格:美国进口


              联系方式
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